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Marie-Nicole Lemieux fait ses études au conservatoire de musique de Chicoutimi et au conservatoire de musique de Montréal. En 1999, elle remporte le grand prix Hydro-Québec du festival de musique du Royaume[2] à Saguenay. Elle connaît le succès en 2000 grâce au Concours musical international Reine Élisabeth de Belgique, où elle remporte le prix de la Reine Fabiola (1er prix) et le prix spécial du lied. Elle est la première Canadienne à remporter cet honneur, ce qui lui ouvre la reconnaissance internationale et lui permet de se produire tant en récital qu'en concert avec de grands orchestres.
En 2005, elle fait ses débuts au Staatsoper de Berlin, participant à Il Ritorno d'Ulisse in Patria de Monteverdi, et elle incarne le rôle de Mitrena dans la création mondiale de l’opéra Motezuma, de Vivaldi, au centre culturel De Doelen, à Rotterdam. En 2006, elle fait ses débuts comme soliste aux États-Unis, d’abord en récital au Kansas puis à titre de soliste invitée avec le Los Angeles Philharmonic Association.
En 2007, elle interprète le rôle-titre dans l'œuvre de Händel, Giulio Cesare, à l’opéra de Nancy (France). En 2008, elle se produit en Europe. En 2009, elle chante à nouveau en Europe (à Vienne, à Munich et au festival de Glyndebourne en Angleterre puis effectue un retour au Canada. En 2010, 2011 et 2012, elle poursuit sa carrière en Europe et en Amérique du Nord.
2012 - Chevalière de l'ordre de la Pléiade, « ordre de la Francophonie et du dialogue des cultures », remis par l'Assemblée parlementaire de la Francophonie
Marie-Nicole Lemieux a enregistré sous différentes étiquettes. En 2004, elle enregistre le rôle-titre d’Orlando, dans l’opéra baroque Orlando furioso de Vivaldi. Le coffret remporte le prix du meilleur enregistrement de l’année aux Victoires de la musique classique en 2005, en France. La même année, elle enregistre le rôle de Unulfo dans Rodelinda de Händel, avec l’ensemble Il Complesso Barocco, sous la direction de Alan Curtis, pour Deutsche Grammophon.
Depuis 2006, elle enregistre régulièrement sous l'étiquette Naïve, maison avec laquelle elle est maintenant liée par un contrat d’exclusivité.
En 2009 sont sortis un enregistrement de lieder de Schumann (Daniel Blumenthal au piano) et une compilation d’airs de Vivaldi avec l’Ensemble Matheus (Jean-Christophe Spinosi). Sorti en automne 2010, Ne me refuse pas, a reçu le grand prix international du disque et du DVD de l’académie Charles-Cros, dans la catégorie « Soliste lyrique ».
En 2013, elle enregistre Lettres de Madame Roy à sa fille Gabrielle, un drame musical sur l'écrivaine Gabrielle Roy dont la musique est composée par André Gagnon et les textes écrits par Michel Tremblay.
En 2017, Les Troyens de Berlioz :Joyce DiDonato, Didon, Marie-Nicole Lemieux, Cassandre, Stéphane Degout, Chorèbe, Michael Spyres, Enée, Cyrille Dubois, Iopas, Mariane Crebassa, Ascagne, Les Chœurs de l'Opéra National du Rhin, Badischer Staatsopenchor, Orchestre philharmonique de Strasbourg, Dir. John Nelson. 4 CD + 1 DVD Warner 2017. Diapason d'or, Choc de Classica..
En 2023, Berlioz, les Nuits d’été,Saint-Saëns, Mélodiespersanes,Ravel, Shéhérazade, Marie-Nicole Lemieux, contralto, Orchestre Philharmonique de Monte-Carlo. CD Erato 2023
Titres
2000 : Coffret des lauréats du Concours musical international Reine Elisabeth de Belgique, Cyprès