La route 321 est unique dans le système québécois car elle se divise en deux segments distincts séparés par entre 67 et 72 km (selon l'itinéraire). Le premier a son extrémité sud à Papineauville aux abords de la rivière des Outaouais sur la route 148 et se termine 52 kilomètres au nord à l'angle de la Rue principale à Duhamel. La deuxième section relie Nominingue à L'Ascension sur 32 kilomètres.
Intersection avec la route 148, à l'extrémité sud de la route 321.
Route 321 à St-André-Avellin.
La rue Principale à Chénéville.
Extrémité nord de la route, au pont de la rivière Rouge à L'Ascension.