Anne Jeffreys intraprese la carriera artistica in giovane età, prima come cantante e, durante l'adolescenza, come indossatrice per l'agenzia di moda newyorkese di John Robert Powers. La sua apparizione nel musical teatrale Fun for the Money le valse una scrittura nel film Musica sulle nuvole (1942), interpretato da Jeanette MacDonald e Nelson Eddy, pellicola con la quale la diciannovenne Jeffreys fece il suo debutto sul grande schermo. Nello stesso anno apparve in alcuni brevi ruoli non accreditati, tra cui quello di un'infermiera ne I falchi di Rangoon, accanto a John Wayne.
Durante gli anni quaranta l'attrice fu sotto contratto sia con la Republic Pictures che con la RKO, interpretando ruoli in diversi B movie. Nel 1944 fu Miss Abbott nel musical Hotel Mocambo, al fianco del giovane Frank Sinatra, e l'anno successivo interpretò Jean La Danse nella commedia horror Zombies on Broadway (1945). Apparve inoltre in Dick Tracy (1945), in cui impersonò Tess Trueheart, ruolo che riprese in una delle successive pellicole della serie, Dick Tracy contro Cueball (1946).
Nella seconda metà del decennio le apparizioni sul grande schermo dell'attrice si diradarono. Dopo Riffraff (1947), al fianco di Pat O'Brien, e i western Frontiere selvagge (1947) e Gli avvoltoi (1948), la Jeffreys intraprese la strada del teatro. Fu protagonista in diversi successi a Broadway, nel 1947 nell'opera Street Scene, l'anno seguente nel musical di Cole PorterKiss Me, Kate, e nel 1952 in un altro musical, Three Wishes for Jaimie.
Ma fu il piccolo schermo a presentarle la migliore opportunità per il prosieguo della carriera. Dal 1953 al 1955 la Jeffreys interpretò Marion Kerby nella serie televisiva Topper, formando con il marito Robert Sterling l'allegra coppia di fantasmi che era stata già protagonista di una delle più note commedie cinematografiche degli anni trenta, La via dell'impossibile (1937), con le interpretazioni di Cary Grant e Constance Bennett. L'attrice e Sterling furono protagonisti anche della serie Love That Jill, in tredici episodi prodotti nel 1958 e, più tardi, di un episodio di Love, American Style (1972).
L'attrice ebbe un periodo di intensa attività negli anni ottanta, prima con il ruolo di Amanda Croft nel noto serial Falcon Crest, nel quale apparve durante la stagione 1982-1983, quindi con la parte di Rita Hargrove, collaboratrice dell'agenzia investigativa condotta da Anthony Franciosa in Detective per amore (23 episodi nella stagione 1984-1985). Altre apparizioni di rilievo furono quelle in General Hospital (1985) e in La signora in giallo (1986).
Da ricordare, fra le sue ultime interpretazioni, quella di Irene Buchannon, la madre di David Hasselhoff nella popolare serie televisiva Baywatch, in episodi prodotti tra il 1993 e il 1998. La sua ultima apparizione cinematografica è quella nel film di coproduzione italiana Vento di Sicilia di Carlo Fusco, uscito nel 2012.
Vita privata
Il primo matrimonio con Joseph R. Serena, celebrato nel 1945, terminò nel 1949 con il divorzio. Nel 1951 la Jeffreys si risposò con l'attore Robert Sterling, da cui ebbe tre figli, Jeffrey, Dana e Tyler. Il matrimonio con Sterling, con il quale apparve più volte sul piccolo schermo, durò fino alla morte dell'attore, avvenuta nel 2006.