Barry Humphries studerade juridik, filosofi och konsthistoria vid universitetet i Melbourne. Efter att ha skrivit och framfört sånger och sketcher i revyer på universitet engagerades han av den nystartade Melbourne Theatre. 1956 skapade han rollfiguren Mrs Everage, en hemmafru från Melbourne som utvecklats till en internationell megastjärna under namnet Dame Edna. En annan av Humphries komiska karaktärer är den omoraliske, försupne och kvinnojagande politikern Sir Les Patterson.
På 1960-talet flyttade Humphries till London och medverkade som skådespelare i West End, exempelvis uruppsättningen av Oliver!. Han slog igenom på allvar i Storbritannien 1969, med sin enmansshow Just a Show på Fortune-teatern.[3]
Mellan 2012 och 2015 gjorde Barry Humphries en avskedsturné. Föreställningen Eat, Pray, Laugh. Barry Humphries Farewell Tour hade premiär sommaren 2012 i Australien, vintern 2013 och våren 2014 gjordes den i London och runtom i Storbritannien. Våren 2015 avslutades turnén i USA. [5]
Sommaren 2015 var Humphries kurator för Adelaide Cabaret Festival.
Humphries skrev två memoarböcker och två romaner bland annat. Han medverkade även som satirisk krönikör i The Spectator.